Felhasznált állat: Wistar patkány, éti csiga (Helix pomatia), törpeharcsa (Ictalurus nebulosus).
Eszközök:
| 1 db nagyolló | cérna | 1 db kisolló | szervedények |
| 2 db kiscsipesz | 6 db injekciós tű | 1 db békatál | 1 db automata pipetta (200 µI) |
| 1 db 0. 2 g-s súly | papírvatta | 2 db üvegpohár |
Anyagok
4.1. táblázat -
| Tyrode oldat patkány vékonybélhez gyomorhoz | Ringer oldat éti csiga nyelőcsőhöz | Ringer oldat törpeharcsa gyomorhoz |
| 40 g NaCl (Reanal) | 32.5 g NaCl | 37.4 g NaCl |
| 1 g KCI (Reanal) | 0.7 g KCI | 0.93 g KCI |
| 1 g CaCl2 (Reanal) | 0.6 g CaCl2 | 1.32 g CaCl2 |
| 0.5 g MgCl2 (Reanal) | 1 g NaHCO3 | 0.20 g NaHCO3 |
| 0.25 g NaH2PO4 (Reanal) | ad 5000 ml desztillált víz | ad 5000 ml desztillált víz |
| 5 g NaHCO3 (Reanal) | ||
| 5 g glükóz (Reanal) | ||
| ad 5000 ml desztillált víz |
4.2. táblázat -
| Ringer oldat patkány uterushoz | Nembutal (CEVA) | Hisztamin (H, Chinoin) | Pilokarpin (Human) |
| 35.76 g NaCl | 45 mg/testsúly kg | Peremin oldat | 1 %-os oldat |
| 1.68 g KCl | (5mg/1 ml) | ezt használjuk | |
| 0.32 g CaCl2 | nem kell hígítani | Dózis: 20 µl | |
| 2.0 g NaHCO3 | |||
| 2.0 g glükóz | |||
| ad 4000 ml desztillált víz |
4.3. táblázat -
| Acetilkolin (ACh) | Adrenalin (A) |
| (Acethilcholin, Reanal) | (Tonogén, Richter Gedeon) |
| Ms.182, por | Ms:184 , inj. ampulla |
| (1 mgl1 ml) - 2.7x10-6 M) | |
| Hígítások: | |
| 18.5 mg ACh + 1 ml Tyrode oldat | 0.8 ml Tonogén + 3.6 ml Tyrode oldat |
| (5x10-5 M dózis-100 µI beadásánál) | (5x10-7 M dózis) |
| 1. 100 µI ACh törzsoldat + 900 µI Tyrode oldat | 1. 1.0 ml törzsoldat + 9.0 ml Tyrode oldat |
| ( 5x10-6 M dózis) | (5x10-8 M dózis) |
| 2. 100 µI ACh 1 oldat + 900 µI Tyrode oldat | 2. 1.0 ml 1 oldat + 9.0 ml Tyrode oldat |
| (5x10-7 M dózis) | (5x10-9 M dózis) |
| 3. 100 µI ACh 2 oldat + 900 µI Tyrode oldat | |
| (5xl0-8 M dózis) | |
| 4.100 µl ACh 3 törzsoldat + 900 µl Tyrode oldat | |
| (5x10-9 M dózis) |
4.4. táblázat -
| Szerotonin (5-HT, Sigma) | 17 β ösztradiol (Sigma) |
| Acetilkolin (ACh, Reanal) | |
| Használt koncentrációk | Hígítás |
| (10-9 M) | 300 µg 17-β-ösztradiol + 0.25 ml Corn oil |
| (10-8 M) | Kezelés |
| (10-7 M) | 0.25 ml./nap s.c. 3 napon át a kísérlet előtt |
| (10-6 M) | |
| (10-5 M) |
Dopamin (Sigma, por)
18.95 mg dopamin + 10 mg C-vitamin + 100 ml dvíz (10-3 M)
ebből 2 ml - 5 x 10-5 M
ebből 1 ml -1 x 10-5 M
100 µI 10-3 M dopamin + 9900 µI dvíz (10-5 M)
ebből 2 ml -1 x 10-6 M
ebből 1 ml - 5 x 10-7 M
ebből 1 ml - 5 x 10-8 M
Oxytocin (OT, Sigma) 200µg/ml azaz 10-6 M konc.
Hígítás:
1. 100 µI törzs + 900 µI fiz.só oldat (10-7 M konc.)
2. 100 µI törzs + 9900 µI fiz.só oldat (10-8 M konc.)
3. 100 µI 2. oldat + 900 µI fiz.só oldat (10-9 M konc.)
100 µl-t kell a fenti oldatokból bemérni a kísérlet során.
Gyomor
Részei: 1. fundus - nyelőcső felőli részen a n. vagus beidegzés - ellazítja 2. corpus - felső részén ingerképző központ, perisztaltika a pylorusig 3. antrum 4. pylorus
A gyomor, a duodenum és a pancreas paraszimpatikus beidegzése és hatása. A n. vagusból felszabaduló acetilkolin fokozza a gyomorsav-, az inzulin- és a glucagon szekrécióját, valamint a vékonybél felső szakaszának a motilitását.
Vékonybél
Emésztés itt fejeződik be. Vitaminok, folyadék, emésztési termékek felszívása. Napi 9 liter folyadék képződik a vékonybélben: 2 liter táplálék + 7 liter bélnedv, víz
Részei:duodénum (patkóbél), jejunum (éhbél), mely az első 2/3-a a bélnek és ileum (csípőbél)
Mirigyek: a. intestinális mirigyek (Lieberkühn-crypták)- mindenhol b. duodenális mirigyek (Brunner mirigyek) - csak a duodénumban c. enterokromaffin sejtek - szerotonin elválasztás
Nyirokszövet: a. magányos (solitarius) nyiroktüszők b. nyiroktüsző aggregátumok (Peyer-plaque csak az ileumban)
Bélmozgások: 1. Szegmentáló kontrakció Körkörös izomzat végzi - 5-10 cm-ként, szabályos időközönként,gyűrűszerűen összehúzódik.Külső beidegzés nem kell a szegmentáló kontrakcióhoz, de intakt plexus myentericus szükséges, béltartalmat nem továbbít. 2. Perisztaltikus hullámok Feszülésre adott válasz - myentericus reflex. Frekvencia a vastagbél felé csökken. 2-25 cm/perc továbbító sebesség. Csak egy irányban működik. 3. Ingamozgás Hosszanti izomzat végzi ide-oda, kistávon (cm-s), keverő mozgás. 4. Bélbolyhok saját mozgása Nyálkahártya izomrétege biztosítja.
Beidegzés: Plexus myentericus (Auerbach plexus) Hosszanti és középső körkörös izomréteg között. Szimpatikus idegrendszer gátolja (adrenalin) – elernyed. Plexus submucosus (Meissner plexus) Középső körkörös izomréteg és a mucosa között. A két plexus egymással kapcsolatban áll. Paraszimpatikus kolinerg beidegzés, a plexusok kolinerg idegsejtjein végződik. A bél simaizom működését és a mirigy működést fokozza. Szimpatikus, noradrenerg beidegzés: A simaizomzat aktivitását gátolja, a véredényeket szűkíti. A kolinerg neuronokon kifejtett hatás az acetilkolin felszabadulást gátolja.
A szimpatikus izgalomra a felszabaduló noradrenalin elernyedést okoz. 1. Gátolja preszinaptikusan az acetilkolin felszabadulását (α2 receptoron keresztül is) és 2. a simaizomsejt felszínén levő β-receptorok izgatásával a cAMP szintet emeli. A vagusból és a bél kolinerg interneuronjaiból felszabaduló acetilkolin kontrakciót vált ki, úgy, hogy az M3-receptort izgatja, és az intracelluláris Ca2+ szint emelkedését váltja ki két módon: a. IP3 és diacilglicerol (DAG) emelkedése kalciumot szabadít fel az intracelluláris raktárakból, b. gátolja a K-+- permeabilitást ami depolarizációt és ez a feszültségfüggő Ca2+ csatornán Ca2+ belépést okoz.
Vastagbél
Folyadék, és Na+ visszaszívás (2 literből kb. 2-300 ml marad). Részei: a. féregnyúlvány (bél tonsilla, az immunrendszer része) b. vakbél c. colon d. végbél
A gyakorlat menete A gyakorlat során a vékonybelet tanulmányozzuk. A preparátumot a csípőbél elejéből készítjük (ok: itt a legerősebb a perisztaltika). A megfigyelhető anyaghatások:
Adrenalin: A szimpatikus beidegzést utánozza. Perisztaltika és a bélfal tónus csökken.
Acetilkolin: A paraszimpatikus beidegzést utánozza. Perisztaltika és a béltónus nő.
Pilokarpin: Paraszimpatikus izgatószer. Bélmotilitás nő.
Hisztamin: Görcsös összehúzódás.
Patkány vékonybél preparálása
1. Patkány altatása - Nembutal 45mg/kg i.p.
2. Hasüreg felnyitása.
3. Gyomor megkeresése.
4. A duodénum, jejunum és ileum kipreparálása. A gyakorlat során az ileum egy darabjával dolgozunk.
5. kb.10-15cm-s béldarab levágása és Tyrode oldatba helyezése.
6. A bél átmosása 10 ml Tyrode-val. (átmosni csak a természetes perisztaltikus irányban lehet).
7. kb. 3-4 cm-s darabokra vágjuk, s ezeket meleg (38 oC) Tyrodet tartalmazó pohárban tartalékoljuk és oxigenáljuk.
8. A béldarab egyik végére kis hurkot kötünk, s ezt a szervedény alsó részébe akasztjuk.
9. A béldarab másik végére egy nagy hurkot kötünk - érzékelő karra akasztjuk.
10. A preparátumot behelyezzük a szervedénybe (38 oC Tyrode oldat, O2 áramoltatás). Megjegyzés: a szervedény űrtartalma 20 ml.
A kísérlet menete
Acetilkolin hatás vizsgálata
1. A preparálás után min.10 percet pihentetni kell a belet.
2. Az Acquisition/Monstart aktiválása.
3. A Record gombbal a számítógép felvételi készenlétbe helyezése.
4. A baloldali ablak az elsődleges jeleket, míg a jobboldali a derivált értékeket mutatja.
5. CTRL1 elindítása (egér) - sárga színűre változik a mérővonal.
6. Min. 30 mp regisztrálás.
7. Adm1 aktiválása.
8. Ezzel egyidejűleg 100 µl anyag beadása (Ach1 dózis).
9. Regisztrálás a hatás lecsengéséig (max: 2 perc).
10. Stop gombbal a regisztráció leállítása.
11. Mosás (szövetfürdő cseréje).
12. 5 perc várakozás.
13. CTRL2 aktiválása
14. Lásd 6-14 pontig (Ach2 Ach4 dózisig).
15. 1-2 és 2-3 Admin között 5-5 perc várakozás, a többinél 10-10 perc.
16. Kísérlet végén az EDR megnyomása (Csak a derivált képernyőre érvényes).
17. 10 perc várakozás.
Adrenalin hatás vizsgálata
1. Az Experiments részben a beladr.stp betöltése.
2. Az adrenalin dózisok beadása a fentebb leírtak szerint.
Pilokarpin és hisztamin hatása
1. 10 perc pihentetés
2. log gomb - név: pilokarpin
3. Ezzel egyidejűleg 100 µI pilokarpin beadása.
4. 2-3 perc adatrögzítés.
5. Log gombbal a felvétel leállítása.
6. Mosás
7.10 perc szünet
8. Log gomb - név: hisztamin
9. Ezzel egyidejűleg 100 µI hisztamin beadása.
10. 2-3 perc adatrögzítés.
11. Log gombbal a felvétel leállítása.
Anatómia
- központi idegrendszertől független bélidegrendszer
- spontán kontrakcióra képes
- körkörös és hosszanti izomrétegek
Élettan
Az éti csiga nyelőcső-gyomor preparátum hosszanti izomzatát az ACh és dopamin tónusos kontrakcióra készteti, a spontán aktivitás csökkenésével. A szerotonin (5-HT) hatása ernyesztő és a spontán aktivitás erős gátlása is megfigyelhető.
Csiganyelőcső preparálása
1. Az éti csiga héját óvatosan megtörjük.
2. Kiszabadítjuk az állat puha testét.
3. Felvágjuk a zsigerzacskó közepétől a fej végéig.
4. Megkeressük a tápcsatornát.
5. A teljes tápcsatornát felkeressük és 3 részre osztjuk: Garat-nyelőcső, gyomor, bélcsatorna
6. A nyelőcső garati végéhez cérnát hurkolunk, a gyomor felöli végéhez pedig horgot erősítünk.
7. A preparátumot behelyezzük a szervedénybe (25 oC Ringer oldat, O2 áramoltatás).
A kísérlet menete
Regisztráljuk a nyelőcsőpreparátum spontán kontrakcióit. Vizsgáljuk meg 10 µM dózisban acetilkolin, majd kimosás után ugyanilyen dózisú szerotonin, vagy a dopamin hatását. 1. A kísérlet során a különböző dózisok beadása között 5-5 perc várakozási idő szükséges, amíg a hatás le nem zajlik. 2. A várakozási idő alatt többször Ringer oldattal átmossuk a preparátumot.
Élettan
A törpeharcsa gyomra erős vagus beidegzés alatt működik. A gyomor hosszanti izomzatát az acetilkolin tónusos kontrakcióra készteti a spontán aktivitás változásával. A hatás dózisfüggő.
Törpeharcsa gyomor preparálása
1. A harcsa száját kétoldalt felvágjuk és dekapitáljuk.
2. Gerincvelejét elroncsoljuk.
3. A hasoldalával felfele preparáló edénybe helyezzük, és rögzítjük.
4. Felvágjuk a hasát egészen a kopoltyú ívekig, és eltávolítjuk a zsigereket.
5. Megkeressük a horgas, izmos gyomrot, és a nyelőcső felöli végéhez fonalat hurkolunk.
6. A preparátumot behelyezzük a szervedénybe (25 oC Ringer oldat, 02 áramoltatás).
A kísérlet menete
Figyeljük meg a spontán működő gyomor preparátum kontrakcióit, 10-9 - 10-5 M tartományban vegyünk fel acetilkolin dózis-hatásgörbét. 1. A kísérlet során a különböző dózisok beadása között 5-5 perc várakozási idő szükséges, amíg a hatás le nem zajlik. 2. A várakozási idő alatt többször Ringer oldattal átmossuk a preparátumot.
Anatómia
Fala 3 rétegű: 1. endometrium (nyálkahártya) 2. myometrium (izomréteg) 3. perimetrium (myometriummal összenőtt) Endometrium: egyrétegű, magas hengerhám, csillós, sok mirigy. Myometrium - simaizom rétegek Külső réteg - vékony - hosszanti és körkörös izomréteg. Középső réteg - vastag - hosszanti és körkörös izomréteg. Dús érhálózat belső - vékony - főleg körkörös izomréteg.
Oxytocin (OT) hatása
Terhes patkányban - az OT receptorszám nagyobb (100-szoros) és ösztrogének hatására az érzékenység is magasabb. A nőstény patkányokat a kísérlet előtt három nappal 50 µg/kg i.m./nap östradiol-benzoáttal vagy 3 héttel előbb ösztradiollal s.c. kezelni kell, hogy a mérés elvégezhető legyen (receptorszám és érzékenység növelés). Szerep: szülés lefolyásában döntő. OT receptorok működése G fehérjékhez kapcsoltan történik. IP3 rendszeren keresztül fejti ki a hatását. Két receptor altípus: A. Foszfolipáz C aktivációján keresztül hat – myometriumban. A Ca2+ L-típusú csatornáinak a működését fokozza. Simaizom kontrakciót okoz. B. Foszfolipáz A aktivációján keresztül hat – deciduában. PGE2 és PGF2α leadást fokozza. Fokozzák az összehúzódásokat.
Az oxytocin koncentráció-arányos méh összehúzódásokat vált ki. A gyakorlat célja dózis-hatásgörbe felvétele.
Patkány uterus preparálása
1. A patkány uterusokat megkeressük.
2. A zsírtól megtisztítjuk.
3. A petefészek alatti részen átvágjuk s az uterust kivesszük.
4. Az uteruszt Ringer oldattal átmossuk óvatosan.
5. A felső és alsó végére hurkot kötünk.
6. A szervedénybe belehelyezzük (30 oC Ringer oldat, Carbogén /95% O2 és 5% CO2/) áramoltatás, 1.0 g-os előfeszítés.
A kísérlet menete
1. Preparálás után 10 perc pihentetés.
2. Experiments setupban az uterus2.stp betöltése.
3. CTRL1 - egy perc regisztrálás.
4. Admin1 – két-három perc regisztrálás.
5. Stop
6. Mosás
7. 5 perc szünet
8. CTRL2 -1 perc regisztrálás.
9. Lásd 3-8-ig (Admin2-Admin4-ig).
10. Kísérlet végén - EDR – dózis-hatásgörbe felvétele.