A hemoglobin mennyiségének meghatározása fotometriás úton

A hemoglobin feladata:

- oxigénszállítás

- hidrogén ionok kötése (sav-bázis egyensúly fenntartása)

- CO kötés

A hemoglobin típusai:

methemoglobin - ferri(3+)vas-sötét szín

- HBA1,

- HBA2

- HBF magzati, erősebb O2 kötés

A hemoglobin oxigén szállítását befolyásolja:

- CO2 szint emelkedése a HbO2 szaturációját csökkenti.

- pH ha csökken akkor a szaturáció kisebb lesz.

- A hőmérséklet ha emelkedik, a szaturáció szintén csökken.

- 2,3 BPG(bisz-foszfoglicerát) - oxigén leadást serkenti, ui. affinitása a dezoxi-hemoglobinhoz nagyobb.

A hemoglobin mennyisége emberben: - férfi: 16%, nő: 14%

A hemoglobin lebontása:

- porfirin gyűrű felhasad- verdoglobin - zöld

- lehasad a globin és a vas - biliverdin - sárga - redukció - bilirubin - sárgásbarna - kötődés albuminhoz – (máj-epe) - urobilin és stercobilin

A hemoglobin szint változása alapján milyen anaemiák vannak?

- hiperchrom

- hipochrom

A hemoglobin (Hb) kimutatása:

- Hemochromogén módszer: N tartalmú bázisok hatására a Hb.-ból vörös színű hemochromogén lesz, s ez 540 nm-en fotometrálható

- Ciánhemoglobinos módszer:(K3[Fe(CN)6] A hemoglobint kálium-ferricianid hozzáadásával methemoglobinná alakítjuk át: hemoglobin + káliumferricianid = metHb. + NaCN = ciánhemoglobin. Ez a termék szintén fotometrálható 540 nm-en.

Cián-hemoglobin képződésén alapuló módszer.

Kálium-ferricianid oldat összetétele:

0.2 g K-ferricianid

0.05 g K-cianid

0.75 g KHCO3

1000 ml desztillált vízben feloldani

A meghatározás kivitele: 10 ml oldathoz 20 µl vért adunk. Vakpróbaként az oldatot használjuk, vér nélkül. A vért tartalmazó mintát a vakpróbával szemben 540 nm-en fotometráljuk.

Standard görbe készítése:

0.5 10 ml reagens + 20 µl vér

1.05 ml reagens + 20 µl vér

2.05 ml reagens + 40 µl vér

A standard vér hemoglobintartalmának meghatározása a vastartalom mérése alapján történik. A reagenst csak automata pipettával szabad kimérni. A hemoglobintartalom kiszámítása a következő képlettel történik: